酸水解前后甘草中4个黄酮类化合物含量的变化

目的:建立甘草提取物中4个活性成分甘草苷、异甘草苷、甘草素和异甘草素的测定方法,并评价酸水解法对4个黄酮类化合物含量测定的影响。方法:采用高效液相色谱法,分别测定乌拉尔甘草乙醇提取液和酸水解提取液中4个活性成分的含量。色谱柱为Agilent HC-C18(150 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相为pH 3甲酸溶液-乙腈,梯度洗脱,流速0.8 mL.min-1,甘草苷和甘草素检测波长为276 nm,异甘草苷和异甘草素的检测波长为370 nm,柱温为25℃(室温)。结果:乌拉尔甘草乙醇提取液中甘草苷、异甘草苷、异甘草素占原药材的质量百分数分别为1.29%,0.33%,0.01%,因药材中甘草素含量过低,未检出;酸水解提取液中甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素占原药材的质量百分数分别为0.71%,0.32%,0.26%,0.11%。结论:酸水解法能显著提高甘草素和异甘草素的含量测定值。     

HPLC同时测定半夏糖浆中琥珀酸、橙皮苷、甘草苷3种成分的含量

目的 建立HPLC同时测定半夏糖浆中琥珀酸、橙皮苷、甘草苷3种成分的含量。方法 采用C₁₈色谱柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,以乙腈-0.2%磷酸溶液（18：82）为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长207 nm,柱温为常温。结果 3种待测成分分离度良好,阴性无干扰;3个成分线性范围分别为4.727~118.17 μg·mL^-1（r=0.999 9）,2.474~61.857 μg·mL^-1（r=0.999 6）,2.469~61.725 μg·mL^-1（r=0.999 9）;琥珀酸、橙皮苷、甘草苷平均回收率（n=9）分别为100.8%,99.3%,100.2%,RSD分别为1.3%,1.2%,1.8%,3批中琥珀酸、橙皮苷、甘草苷含量范围分别为0.072 2~0.079 4、0.029 9~0.034 8,0.022 8~0.029 0 mg·mL^-1。结论 该方法操作简单,缩短了分析时间,重复性好,可为半夏糖浆质量控制提供参考。     

经典名方泻白散物质基准HPLC指纹图谱的建立及3种指标成分含量测定

目的建立经典名方泻白散物质基准HPLC指纹图谱以及3种指标成分桑皮苷A、甘草苷、甘草酸含量测定方法。方法指纹图谱色谱条件:检测波长254 nm/325 nm,柱温35℃;体积流量0.8 mL/min;进样量25μL;流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈,二元梯度洗脱:0～20 min,5%～10%乙腈;20～33 min,10%～15%乙腈;33～50 min,15%～20%乙腈;50～95 min,20%～58%乙腈。采集10批次泻白散物质基准指纹图谱,采用中国药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版"软件对其进行评价。含量测定色谱条件:检测波长237 nm,柱温30℃;体积流量1.0 mL/min;进样量5μL;流动相为0.1%磷酸水溶液-乙腈,二元梯度洗脱:0～10 min,5%～20%乙腈;10～18 min,20%～60%乙腈;18～26 min,60%～100%乙腈;26～38 min,100%乙腈;38～41 min,100%～5%乙腈;41～45 min,5%乙腈。结果根据匹配结果,在254 nm波长下确定了55个共有峰,在325 nm波长下确定了57个共有峰。在共有峰中共指认桑皮苷A(S)、甘草苷、甘草酸铵3种物质。经过方法学研究,其精密度、稳定性、重现性良好。对10批次泻白散物质基准指纹图谱进行评价,结果与对照指纹图谱之间相似度均大于0.9。桑皮苷A、甘草苷、甘草酸铵含量测定方法的平均加样回收率分别为97.82%、97.40%、105.81%,RSD分别为4.41%、2.51%、1.19%,均满足《中国药典》2015年版要求,3种成分分别在25.25～2525、25～2 500、8.5～850 ng线性关系良好,精密度、稳定性、重复性良好。对10批次泻白散物质基准进行含量测定,其中桑皮苷A质量分数为11.6～35.5 mg/g,甘草苷质量分数为0.1～1.6 mg/g,甘草酸质量分数为0.3～2.5 mg/g,3种成分含量差异较大,说明不同产地的桑白皮、甘草药材质量差异较大。结论建立经典名方泻白散物质基准HPLC指纹图谱及多指标成分含量测定的方法,为泻白散物质基准质量标准研究提供依据。     

DESI-MSI技术在经典名方芍药甘草汤质量控制中应用研究

目的使用超高效液相色谱-二极管阵列检测器检测法(UHPLC-DAD)和解吸电喷雾电离-离子化质谱成像技术(desorption electrospray ionization-mass spectrometry imaging,DESI-MSI)对15批芍药甘草汤(Shaoyao-Gancao-Decoction,SGD)物质基准和对应实物进行分析,考察DESI-MSI在经典名方SGD质量控制中的优势。方法以SGD为研究模型,采用传统UHPLC-DAD法建立物质基准指纹图谱,并对SGD指标成分(芍药苷、甘草苷、甘草酸)含量、出膏率进行考察。同时,以芍药甘草汤对应实物冻干粉为研究载体,将其复溶后点样于定性滤纸,并固定于载玻片制成样品,以甲醇-甲酸(1 000∶1)为喷雾溶剂,体积流量3μL/min;扫描范围m/z 100～1 200;空间分辨率300μm;喷雾气(N2)压力0.5 MPa;离子源温度120℃,采用正负离子全扫描样本。结果 DESI-MSI法能检测到SGD指标成分芍药苷、甘草苷、甘草酸以及共有峰成分芍药内酯苷等。同时,DESI-MSI法还能检测到来自甘草、白芍的甘草皂苷G2、甘草皂苷J2、没食子酸、柠檬酸、对羟基苯甲酸等11种成分,并对其相对含量进行直观呈现,定性分析能力远强于UHPLC-DAD法。结论基于DESI-MSI技术无需进行复杂的样品前处理,可以在无对照品情况下进行复杂样品的定性、相对含量分析,灵敏度高,分析能力强,可以作为经典名方物质基准、对应实物及配方颗粒样品的质控研究方法。     

基于液质联用技术和植物代谢组学的甘草炮制品化学成分差异性分析

目的:识别并鉴定不同甘草炮制品的质量差异标志物。方法:运用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS~E)技术,通过负离子检测模式,采集各甘草炮制品成分高精度质荷比及离子响应强度信息;利用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对预处理后的数据集进行分析,快速搜寻出不同甘草炮制品间的差异性成分,依据相对分子质量、碎片离子、质谱数据库和相关文献对差异性成分进行鉴定,研究甘草炮制前后成分迁移情况。结果:从甘草片、清炒甘草、蜜炙甘草3组炮制品中共识别10个质量差异标志物,主要为甘草苷和甘草酸的衍生物,其中6'-Oacetylliquiritin apioside,6'-O-acetylliquiritin apioside异构体,6'-O-acetylliquiritin,芒柄花黄素和11-脱氧-18β-甘草亭酸在甘草片中含量最高;6'-O-acetylisoliquiritin apioside,6'-O-acetylisoliquiritin,异甘草苷和单葡萄糖醛酸甘草次酸在清炒甘草中含量最高;甘草苷在蜜炙甘草中含量最低。结论:甘草片、清炒甘草和蜜炙甘草存在一定的化学成分差异,可为甘草炮制品的质量控制和药效研究奠定物质基础。     

Simultaneous HPLC Determination of Four Active Compounds in Fengshiding Capsules,a Chinese Medicine

A high performance liquid chromatography method was established for simultaneously determining four bioactive components, salicin, liquiritin, paeonolum, and imperatorin in Fengshiding capsule, a widely used traditional Chinese medicine for treating rheumatic disease. The chromatographic separation was performed on a Shimadzu Shim-pack Stable Bond C₁₈ column using gradient elution with methanol and water. The analytical method was validated through precision, repeatability and stability, and the relative standard deviation values were less than 3%, respectively. The recoveries of the four investigated compounds ranged from 95.80 to 101.21% with relative standard deviation values less than 3.2%. Then this proposed method was successfully applied to determine six batches of Fengshiding commercial products of capsule dosage form from two pharmaceutical factories. This study might provide a basis for quality control for this traditional Chinese medicine preparation.     

八宝瑞生丸质量标准的研究

目的:建立八宝瑞生丸的质量标准.方法:采用TLC对处方中的延胡索、香附、山楂进行定性鉴别;采用HPLC法测定甘草苷的含量.色谱柱为Phenomenex C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.2%冰醋酸溶液(12:88),流速为1.0mL·min-1;检测波长276 nm.结果:鉴别方法专属性强,甘草苷进样量在0.02～0.39 ug范围内线性关系良好(r=0.9999);平均回收率为99.86%,RSD为0.9%.结论:方法灵敏、准确,重现性好,可作为八宝瑞生丸的质量控制方法.     

脑苷肌肽对缺氧缺血性脑病新生大鼠SIRT1/mTOR/p70S6K通路及神经元凋亡的影响

目的 利用斑马鱼模型结合网络药理学,研究甘草酸拮抗乌头碱心脏毒性及作用机制,探讨附子-甘草配伍减毒的现代科学内涵。方法 选用受精后48 h（48 hpf）的健康野生型AB系斑马鱼,脱膜后随机移入6孔板中,每孔30枚。对照组加入新鲜养鱼水;模型组和各药物处理组均给予乌头碱溶液,终浓度均为10 μmol/L;各药物组同时分别给予低、中、高浓度（10、50、100 μmol/L）的甘草酸、甘草素、甘草苷和低、中、高浓度（1、5、10 μmol/L）的异甘草素,各组斑马鱼处理后放入恒温光照培养箱中培养至72 hpf,在显微镜下记录斑马鱼20 s心跳并拍照,计算心率,并利用Image-Pro Plus5.0软件计算心包面积,筛选甘草中拮抗乌头碱心脏毒性的成分。通过心脏结构与功能分析、活性氧（ROS）和凋亡细胞检测,进一步验证甘草酸拮抗乌头碱心脏毒性作用。基于PharmMapper、Swiss Target Prediction、STITCH数据库收集乌头碱毒性作用靶点,利用CTD、GeneCards、DisGeNET数据库,以“心脏毒性”“心脏损伤”“心衰”为关键词检索靶点,将上述两组靶点导入Draw venn在线绘图取交集,得到乌头碱心脏毒性作用靶点集;从PharmMapper数据库中收集甘草酸活性靶点集;将2个靶点集共有靶点导入String数据库进行蛋白互作分析;使用Cytoscape 3.6.0软件对结果进行拓扑分析,以节点度值中位数为标准筛选重要靶点;得到的靶点导入DAVID数据库,进行GO和KEGG分析。结果 与对照组比较,模型组幼鱼心包水肿显著（P<0.01）,心率显著升高（P<0.01）;与模型组比较,甘草酸与异甘草素各浓度组、甘草苷高浓度组心包面积显著下降（P<0.01）,甘草酸效果更加明显且呈浓度相关性;甘草酸低和高浓度、甘草素高浓度和异甘草素低浓度拮抗乌头碱所致心率加快效果显著（P<0.05、0.01）。甘草酸可浓度相关性地拮抗乌头碱导致的斑马鱼心室短轴缩短率降低,且高浓度组具有显著性差异（P<0.01）;甘草酸显著抑制乌头碱诱导的斑马鱼体内活性氧生成（P<0.01）;明显减弱乌头碱导致的细胞凋亡。甘草酸拮抗乌头碱心脏毒性的作用机制可能与MAPK、GRB2、CDC42、EGFR、GSK3B、SRC等关键靶点,以及PI3K-Akt、Ras、FoxO等信号通路相关。结论 甘草酸可以显著拮抗乌头碱心脏毒性,可能通过调控PI3K-Akt、Ras信号通路等发挥作用。     

HPLC同时测定参柏颗粒中甘草苷、柚皮苷、盐酸小檗碱

目的建立参柏颗粒中甘草苷、柚皮苷和盐酸小檗碱的HPLC测定方法。方法色谱柱为Diamonsil C18柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长276 nm,柱温30℃。结果甘草苷、柚皮苷、盐酸小檗碱的线性范围分别为0.164～0.820、0.480～2.400、0.048～0.240μg,平均回收率分别为98.6%、98.4%、98.0%。结论该方法简便快速、准确灵敏,为评价和控制参柏颗粒的质量提供了可靠的方法。     

炮制对甘草中主要苷类成分质量分数及其煎出量的影响

目的 单因素考察不同炮制方法对甘草中芹糖甘草苷(LQA)、甘草苷(LQN)、甘草芹葡苷(LCD,异甘草素-葡萄糖芹糖苷)、异甘草苷(ILN)和甘草酸(GL)的质量分数、煎出量及煎出率的影响.方法 采用已建立的HPLC法,同时测定甘草中LQA、LQN、LCD、ILN和GL在不同炮制条件下(不加或加入25%炼蜜,加热60 min,加热温度为90、110、130、150℃;加入25%炼蜜,加热温度为130℃,加热30、60、90、120min)的质量分数、煎出量,计算煎出率.结果 随加热强度(温度及时间)的增大,清烘制得的制甘草中LQA、LQN和GL的质量分数、煎出量显著降低,ILN的质量分数、煎出量显著增加,但其煎出率显著降低.加入炼蜜使以上成分的质量分数、煎出量的变化幅度增强;并在不同程度上影响LQA、LQN、GL的煎出率.结论 加热与加蜜对甘草中主要苷类成分的煎出率均有不同程度的影响.